DMEM 培養基

DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養基，是在MEM培養基的基礎上研制的。與MEM比較增加了各種成分用量，同時又分為高糖型（4500mg/L）和低糖型(1000mg/L)。

DMEM是 dulbecco's modified eagle medium的縮寫，所以其特點主要包括以下：

（1）氨基酸含量為依格爾培養基的2倍，且含有非必需氨基酸，如；

（2）維生素含量為依格爾培養基的4倍；

（3）含有糖酵解途徑中的重要物質——丙酮酸；

（4）含有微量的鐵離子。

注意事項：

（1）無菌操作：細菌或霉菌污染是培養失敗的常見原因，必須加強各個環節的無菌操作觀念，以預防為主，一旦污染，一般很難消除。

（2）培養液：所用的培養液必須滿足細胞生存和生長的必要條件。由于細胞來源的動物種類、組織類型不同，對培養液的要求有一定的差異，必要時可用預實驗的方法選擇適當的培養液。

（3）胎牛血清：胎牛血清對于維持培養細胞的生存和促進細胞增殖起著關鍵性作用。可選擇多種不同批號的胎牛血清進行小樣分析。一旦確定某一廠家的某一批號胎牛血清后，就保持應用至實驗完成。想了解血清的秘密，可以參考Nothing：關于血清，你不知道的太多了

（4）：必須新鮮配制，貯存時間過長(即使是-20℃低溫保存)，也將影響消化效力，導致消化時間過長，細胞損傷增加。

（5）L-幾乎所有細胞對有較高的要求，細胞需要核酸和蛋白質，在缺時，細胞會因生長不良而死亡。液中很不穩定，加有養液在4℃冰箱貯存兩周以上時，就應重新加入原來量的

（6）靜置培養：原代細胞在消化分離后，置于CO2培養箱的頭24～48h (必要時72h)內，應處于絕對靜置狀態，切忌不時地取出培養瓶觀察生長狀況，這將使原代分離細胞難以貼壁，更談不上伸展和增殖，初學者尤應注意。不必擔心培養液中的營養成分會消耗光，在細胞增殖之前對營養的要求并不大。原代培養初期僅加一薄層培養液的目的也在于有利于細胞貼壁伸展。

（7）消化時間：一般消化至肉眼尚可見微小組織顆粒即可，因為此時組織顆粒已經松散，略經吹打即成細胞團或單個細胞，過久的消化往往導致細胞損傷加重，細胞培養成活率降低。

（8）其他生長因子：經過以上處理，一般原代分離細胞培養均可以成功。對于少數特殊類型細胞也可以考慮加一些特殊的生長因子，如胰島素能促使細胞攝取葡萄糖和氨基酸。另外，內毒素、EGF、FGF等均有促有絲分裂作用，但費用較高。

細胞培養最初認識：

什么是細胞培養？ 細胞培養是指將細胞從動物或植物體內取出，然后在適宜的人工環境中生長的過程。細胞可以在培養前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。

原代培養：

原代培養是指細胞從組織中分離出來后，在適宜條件下增殖，直到它們占據所有可用的基質（即達到匯合狀態）的培養階段。在此階段，必須通過將細胞轉移到含有新鮮生長培養基的新容器中進行繼代培養（即傳代），以為其提供更多的繼續生長空間。

細胞系：

第一次傳代培養后，原代培養物即被稱為細胞系。來自于原代培養的細胞系壽命有限（即：有限細胞系），隨著細胞的傳代，生長能力的細胞會占據優勢，最終導致細胞群體在基因型和表型上達到一定程度的均一性。

細胞株：

如果通過克隆或其他方法從培養物中陽性篩選出了細胞系的亞群，則該細胞系成為一個細胞株。與親代細胞系起始時相比，細胞株通常會獲得一些其他的遺傳學改變。

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